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La integración de métodos genéticos, de microscopía de fluorescencia y de análisis computacional permite reconstruir la arquitectura del exocisto in vivo

El exocisto es un complejo de ocho proteínas diferentes que dirige las vesículas secretoras a la membrana plasmática, como paso previo a la fusión de las dos membranas en el proceso de exocitosis celular. 


El artículo publicado en Cell, del grupo dirigido por el Dr. Gallego, combina estrategias de ingeniería celular, microscopía de fluorescencia cuantitativa y análisis computacionales para determinar la estructura 3D del exocisto en células vivas, con una precisión de nanómetros. Para anclar el exocisto en una plataforma estática plana se diseñaron células de levadura en las que se inhibía la endocitosis mediante latrunculina A, las cuales expresaban en la cara interna de la membrana plasmática la proteína adaptadora de clatrina Sla2 unida al fluoróforo RFP y a FKBP, de modo que esta reclutase, en un mecanismo inducido por rapamicina, una proteína del exocisto unida al dominio FRB afín a FKBF-rapamicina.

 

 

Esta segunda proteína actuaba como cepo de otras proteínas del exocisto marcadas con GFP. Localizando y cuantificando la fluorescencia emitida por RFP y GFP para cada combinación cepopresa los autores han establecido un modelo 3D del exocisto. Las ocho proteínas del mismo formarían una estructura a modo de mano con la palma de la misma interaccionando con la membrana plasmática y unos dedos interaccionando con la membrana de las vesículas secretoras, sin que ello interfiriese con el necesario contacto entre las dos membranas previo a su fusión. Aparte del interés intrínseco del trabajo para caracterizar un proceso fundamental como la exocitosis, el trabajo permite suponer que una estrategia experimental integrativa como la empleada en el mismo pueda extenderse al estudio de la anatomía de otros complejos proteicos heteroméricos en condiciones in vivo, complementando otras aproximaciones como la microscopía electrónica de alta resolución. 

 

Picco A, Irastorza-Azcarate I, Specht T, Böke D, Pazos I, Rivier-Cordey AS, Devos DP, Kaksonen M, Gallego O. 2017. The In Vivo Architecture of the Exocyst Provides Structural Basis for Exocytosis. Cell.168:400-12.


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